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荧光定量PCR
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产品: 浏览次数:579荧光定量PCR 
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最后更新: 2011-11-10 08:44
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详细信息
荧光定量PCR
荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出,是一种具有革命意义的定量PCR技术。其原理是在PCR指数扩增期间通过连续监测荧光信号强弱的变化来实时测定特异性产物的量,并据此推断目的基因的初始量。由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃,而且与常规PCR相比,具有特异性更强、闭管实时测定、自动化程度高等特点,已成为国际公认的核酸分子定量的金标准,在基因表达研究和临床疾病检测等领域得到了广泛的应用。

瑞基生物为您提供荧光定量PCR一站式解决方案,您只需准备好样品,其余全部由我们来为您完成。有染料法(SYBR Green)和探针法(Taqman、分子信标等)两种实验方法可供选择。实验中所用试剂全部为进口名牌产品,确保为您提供精确的检测数据,获得生物学相关的结果。
 

主要服务内容包括:

1.引物、探针设计与合成:根据基因序列设计并合成特异性real-time PCR引物和探针。
2. RNA抽提:
(1)组织样品:取100mg组织样品加1ml Trizol,匀浆后抽提RNA。
(2)细胞样品:取1×107个细胞,PBS洗涤三次,去PBS后加1ml Trizol,裂解后抽提RNA。
3. RNA质量检测:
(1)测定RNA在260nm和280nm波长处的吸收值,以计算其浓度并评估纯度。
(2)变性琼脂糖凝胶电泳,检测RNA纯度及完整性。
4. 逆转录:使用逆转录酶(RNase H-)将样品RNA逆转录为cDNA。
6. 标准曲线制备:将标准品质粒做梯度稀释后,进行real-time PCR扩增和检测,以Ct值对拷贝数绘制标准曲线。
7. 定量PCR反应:将待测样品加入优化过的real-time PCR反应液中,进行real-time PCR扩增,检测目的基因和内参基因的Ct值。每反应均做3个平行复孔。
8. 数据分析:
(1)相对定量:使用△△Ct法计算目的基因在不同组间的表达差异。
(2)绝对定量:将样品的Ct值代入标准曲线,以对目的基因进行定量。
(3)熔解曲线分析:确定产物特异性。
9. 实验报告:
(1)详细实验步骤。
(2)数据结果和相关图表

您需提供:
1. 新鲜的组织样品或细胞样品,干冰保存。
2. 背景资料:目的基因的Gene ID、样品来源和mRNA丰度等。

收费标准及实验周期:
1. RNA提取费用:
少于20样品:150元/个
    20样品以上:120元/个
2. 定量PCR反应费用:
    一个基因每样品150元
    二个基因每样品120元
    三个基因以上100元/反应
3. 引物和探针合成费用:
    引物:1.6元/bp
    探针:1200元/条
4. 内参引物探针:免费
5. 实验周期一般为两周

 

- Email: info@realgene.com.cn;
- 电话: +86-21-54460771 (手机): +86-152 2118 0720
- 传真: +86-21-54460772
 

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